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合成PLL coating Fe3O4 nanoparticles（30nm）納米材料的3個(gè)方法

瑞禧生物小編分享：合成PLL coating Fe3O4 nanoparticles（30nm）納米材料的3個(gè)方法：

1.制備過程：

按n(Fe2+):n(Fe3+)=1:2的 FeCl2-4H2O和 FeCl3·6H2O混合溶液中,加入物質(zhì)的量為n (Fe2+)的0.1-1倍的Na3Cit·2H2O;劇烈攪拌下用0.1M NaOH調(diào)節(jié)溶液,使其pH=11，并持續(xù)攪拌30min，然后將混合溶液在80℃油浴中反應(yīng)2h，得到沉淀,抽濾后，用去離子水洗滌5次后，在室溫條件下通過真空干燥得到磁性Fe3O4納米顆粒。

然后準(zhǔn)確稱取3 mg 磁性Fe3O4溶于 3 mL MES (0.1M) pH5.8緩沖溶液中，超聲分散;稱10 mg NHS，9 mg EDC加入上述溶液中，超聲分散30 min，加入420uL( 1 ug/uL)PLL，搖勻反應(yīng)6 h，用去離子水洗滌3次，真空干燥得到磁性F3O4-PLL納米顆粒。

利用了檸檬酸鈉作為表面修飾劑，使得Fe3O4表面修飾上大量羧基，增大了其空間位阻和表面靜電排斥力，增加其穩(wěn)定性和分散性。然后采用層層自組裝技術(shù)，將聚賴氨酸通過酰胺鍵與羧基化的Fe3O4聯(lián)結(jié)。

取10 ul SPIONS，置于無菌Ep管中。將裝有SPIONS的無菌Ep管置于超凈工作臺上，打開Ep管蓋，在紫外燈下照30 min以上(以后每次打開Ep管均在無菌環(huán)境下)。

向裝有SPIONS的無菌Ep管中加入1.0 ml PBS溶液，封好管口，冰水浴超聲分散15 min至溶液中無肉眼可見顆粒，12000 rpm離心10 min，棄上清。沉淀重懸于1 ml PBS溶液中，冰水浴超聲分散20 min，加入3.0 mg PLL干粉，充分混勻后再離心，棄上清，沉淀重懸于適量PBS溶液中，冰水浴超聲充分分散后4℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

獲得密度均勻的SPIONSPLL復(fù)合物懸浮溶液。懸液4℃放置24 h后，觀察納米微粒的沉淀現(xiàn)象，SPIONS--PLL由于重力作用沉至管體中間位置，仍為懸浮狀態(tài)，輕輕晃動(dòng)SPIONS—PLL又均勻懸浮于液體中。

3.制備過程：

將質(zhì)量濃度500 mg/L葡聚糖T-10溶解于定量的蒸餾水中,待其溶解后,加入質(zhì)量濃度33 mg/L氯化鐵(FeCl3.6H2O)、質(zhì)量濃度12 mg/L氯化亞鐵(FeCl2·4H2O),充分溶解后,于60℃水浴中逐滴加入定量的氨水,使pH為12,攪拌下反應(yīng)1 h后,將反應(yīng)產(chǎn)物置于–鐵–硼稀土強(qiáng)磁塊上，磁性分離，用蒸餾水和無水乙醇反復(fù)洗滌，用生理鹽水重懸,濾膜過濾Sterilization,得到外包葡聚糖的磁性Fe3O4將等質(zhì)量的多聚賴氨酸與之混合,用超聲波分散Ih左右,將反應(yīng)產(chǎn)物置于物-鐵–硼稀土強(qiáng)磁塊上靜置3d,磁性分離,用生理鹽水重懸,再用濾膜過濾Sterilization，得到PLL-IONP。

知識拓展：

Poly-L-lysine（PLL）是一種多聚賴氨酸，通常用作生物實(shí)驗(yàn)室中的涂層劑、細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)以及在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中作為藥物傳遞載體。PLL的生產(chǎn)通?？梢酝ㄟ^以下三種方法：

化學(xué)合成法： 這是一種常用的PLL生產(chǎn)方法。化學(xué)合成法通常從L-賴氨酸（L-lysine）出發(fā)，經(jīng)過一系列化學(xué)反應(yīng)，合成出具有特定長度的PLL。合成過程中，可以通過控制反應(yīng)條件和反應(yīng)時(shí)間來控制PLL的分子量和長度。

酶法合成法： 酶法合成是一種生物合成PLL的方法。通過使用特定的酶，例如蛋白酶（protease），可以催化L-賴氨酸的聚合，從而生成PLL。這種方法相對溫和，不需要使用高溫或高壓條件，因此可以得到較為純凈的PLL。

基因工程法： 基因工程法是一種現(xiàn)代生物技術(shù)方法，可以通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)在微生物（如大腸桿菌）中表達(dá)和合成PLL。這種方法通常涉及將PLL基因?qū)氲剿拗魑⑸镏?，使其在宿主?xì)胞內(nèi)合成PLL。之后，可以通過培養(yǎng)、提取和純化的步驟來得到目標(biāo)產(chǎn)品。這種方法具有高度的可控性和可調(diào)性，可以實(shí)現(xiàn)定制化的PLL生產(chǎn)。

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