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組氨酸標簽(his-tag)是蛋白純化的首選標簽。蛋白質研究和生產中多采用商品ni-次氨基三乙酸(ni-nta)凝膠作為親和層析樹脂純化組氨酸標簽蛋白。下面瑞禧生物小編整理了一種用于組氨酸標簽蛋白純化的納米二氧化硅顆粒的制備方法。
具體步驟如下:
步驟1,將納米二氧化硅顆粒超聲分散在乙醇中,加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷,常溫攪拌,離心,得到氨基化的納米二氧化硅顆粒;
步驟2,將氨基化的納米二氧化硅顆粒用磷酸鹽緩沖液洗滌除去未反應的3-氨基丙基三乙氧基硅烷,超聲分散在磷酸鹽緩沖液中,加入戊二醛溶液,常溫攪拌,反應結束后,磷酸鹽緩沖液洗滌,離心,得到醛基化的納米二氧化硅顆粒;
步驟3,醛基化的納米二氧化硅顆粒用磷酸鹽緩沖液重新懸浮,加入含亞氨基二乙酸的4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸溶液,常溫攪拌,用tris-hcl緩沖液洗滌和重新懸浮,加入氰基硼氫化鈉溶液,常溫攪拌,離心,tris-hcl緩沖液洗滌,得到用于組氨酸標簽蛋白純化的納米二氧化硅顆粒。
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