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由于殼聚糖的高分子特性,其水溶性差,只能在酸性水溶液中溶解,葉酸又無法溶于酸性水溶液,所以,采用先將殼聚糖與DMSO中的葉酸偶聯,后進行熒光標記及采用離子交聯反應法制備納米粒的方法,用異硫氰酸熒光素標記殼聚糖和葉酸偶聯殼聚糖。
采用紅外光譜儀分析葉酸與殼聚糖的偶聯情況。如上圖所示,葉酸偶聯殼聚糖的紅外光譜。從葉酸偶聯殼聚糖的紅外光譜可以看出:NH2在1640 cm處的吸收峰和COOH在1692 cm~處的吸收峰消失,在1562 cm處出現了新的強吸收峰,說明殼聚糖上的氨基與葉酸上的羧基形成了酰胺鍵,兩者成功偶聯。
熒光標記的葉酸-殼聚糖納米粒的顆粒粒徑比較集中,無顆粒團聚現象,平均粒徑約為290nm。熒光標記的葉酸-殼聚糖納米粒的原子力顯微鏡掃描像。可見:其顆粒形態規則,顆粒大小比較均勻,無顆粒團聚現象。此次完善了葉酸修飾殼聚糖納米載體的制備工藝,為后續靶向性納米制劑的研制提供了技術手段。
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熒光標記的葉酸殼聚糖納米粒的制備:稱取10 mg異硫氰酸熒光素(FITC),溶于10mL無水乙醇中,在磁力攪拌條件下逐滴加入到20mL葉酸-殼聚糖的醋酸溶液中,避光反應4 h,使FITC上的碳原子與殼聚糖上的氨基反應以便進行標記。用10mol/LNaOH調節pH值至9。離心用蒸餾水洗滌,直至濾液澄清呈無色為止。將沉淀重新用2%醋酸溶液溶解,用10 mol/L NaOH調節pH值至5,在磁力攪拌條件下逐滴加入10mL TPP溶液(2g/L)。反應20min后得到熒光標記的葉酸-殼聚糖納米粒"1。
采用紅外光譜儀分析葉酸與殼聚糖的偶聯情況。如上圖所示,葉酸偶聯殼聚糖的紅外光譜。從葉酸偶聯殼聚糖的紅外光譜可以看出:NH2在1640 cm處的吸收峰和COOH在1692 cm~處的吸收峰消失,在1562 cm處出現了新的強吸收峰,說明殼聚糖上的氨基與葉酸上的羧基形成了酰胺鍵,兩者成功偶聯。
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