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多肽作為一種化合物,也是一類半抗原,缺乏一定的免疫原性,單獨的多肽通常太小不足以激起充分的免疫反應,而帶抗原表位的載體蛋白有利于刺激輔助性細胞,進一步誘導細胞免疫反應。實驗中經常利用多肽修飾基團與載體蛋白制備形成全抗原,其中Pfs48/45抗原多與載體蛋白偶聯可以增加多肽的特異性。
載體蛋白修飾馬來酰亞胺基團:
用過濾器將溶解載體蛋白(rEPA或BSA)的緩沖液轉換乙二胺四乙酸EDTA,并調節蛋白濃度。Sulfo-EMCS粉末溶解,加入載體蛋白液中反應1h,迅速轉換緩沖液至PBS-EDTA中,調節蛋白濃度測定載體蛋白上所加的馬來酰亞胺基團數量。
Pfs48/45-158多肽制備:
用馬來酰亞胺修飾的載體蛋白滴定 Pfs48/45-158多肽,確定量和多肽的摩爾數。用PBS-EDTA配制多肽溶液,在7個反應管中加入等量的多肽溶液,除第1管外,在第2~7管中加入載體蛋白rEPA-M或BSA-M,加入量逐漸遞增,在溶液上覆蓋氮氣后,22℃緩搖反應1h;加入試劑測定As值,檢測反應后殘余的Pfs48/45-158多肽。
載體蛋白偶聯Pfs48/45-158多肽:
根據滴定終點時的體積比,在馬來酰亞胺修飾的載體蛋白中加入過量的Pfs48/45-158多肽,覆蓋氮氣后,緩搖反應1h;對PBS溶液充分透析以去除未反應的Pfs48/45-158多肽。測定偶聯后的載體蛋白濃度,用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定偶聯產物Pfs48/45-158-BSA。
通過載體蛋白修飾馬來酰亞胺基團與Pfs48/45-158多肽偶聯的制備,PIs48/45-158多肽與載體蛋白的分子特異性結合,使其生物活性增加。PIs48/45-158多肽與載體蛋白偶聯還形成全抗原,對臨床醫學中的疾病起到一定控制免疫作用。這種方法簡便易操作,可以使多肽-蛋白偶聯產物的質量和穩定性。
除此蛋白偶聯外,瑞禧生物還可提供磷脂-PEG偶聯多肽,PEG修飾多肽,共聚物修飾多肽,二氧化硅/上轉換/量子點修飾多肽,多糖修飾多肽,藥物偶聯多肽,MOF修飾多肽。
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