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蛋白偶聯多肽-載體蛋白修飾基團與Pfs48/45-158多肽偶聯的制備及應用

時間:2022-02-17 17:38:43       瀏覽:605

多肽作為一種化合物,也是一類半抗原,缺乏一定的免疫原性,單獨的多肽通常太小不足以激起充分的免疫反應,而帶抗原表位的載體蛋白有利于刺激輔助性細胞,進一步誘導細胞免疫反應。實驗中經常利用多肽修飾基團與載體蛋白制備形成全抗原其中Pfs48/45抗原多載體蛋白偶聯可以增加多肽的特異性

 

載體蛋白修飾馬來酰亞胺基團

用過濾器將溶解載體蛋白(rEPA或BSA)的緩沖液轉換乙二胺四乙酸EDTA,并調節蛋白濃度。Sulfo-EMCS粉末溶解,加入載體蛋白液中反應1h,迅速轉換緩沖液至PBS-EDTA中,調節蛋白濃度測定載體蛋白上所加的馬來酰亞胺基團數量。

 

Pfs48/45-158多肽制備:

馬來酰亞胺修飾的載體蛋白滴定 Pfs48/45-158多肽,確定量和多肽的摩爾數。用PBS-EDTA配制多肽溶液,在7個反應管中加入等量的多肽溶液,除第1管外,在第2~7管中加入載體蛋白rEPA-M或BSA-M,加入量逐漸遞增,在溶液上覆蓋氮氣后,22℃緩搖反應1h;加入試劑測定As值,檢測反應后殘余的Pfs48/45-158多肽。

 

載體蛋白偶聯Pfs48/45-158多肽:

根據滴定終點時的體積比,在馬來酰亞胺修飾的載體蛋白中加入過量的Pfs48/45-158多肽,覆蓋氮氣后,緩搖反應1h;對PBS溶液充分透析以去除未反應的Pfs48/45-158多肽。測定偶聯后的載體蛋白濃度,用二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定偶聯產物Pfs48/45-158-BSA

                                             

通過載體蛋白修飾馬來酰亞胺基團Pfs48/45-158多肽偶聯的制備,PIs48/45-158多肽與載體蛋白的分子特異性結合,使其生物活性增加PIs48/45-158多肽與載體蛋白偶聯還形成全抗原對臨床醫學中的疾病起到一定控制免疫作用。這種方法簡便易操作,可使多肽-蛋白偶聯產物的質量和穩定性。

 

除此蛋白偶聯外,瑞禧生物還可提供磷脂-PEG偶聯多肽,PEG修飾多肽,共聚物修飾多肽,二氧化硅/上轉換/量子點修飾多肽,多糖修飾多肽,藥物偶聯多肽,MOF修飾多肽。

 

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