- 029-86354885
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使用BDP 581/591染料通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的一般建議:
以下建議是根據(jù)NS0細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果制定的。建議為細(xì)胞類型和當(dāng)前任務(wù)確定染料,ROS誘導(dǎo)劑,抗氧化劑和實(shí)驗(yàn)條件的最佳濃度。
1.可以使用懸浮液和貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物。細(xì)胞應(yīng)在完整的培養(yǎng)基中生長(zhǎng),但與染料,ROS誘導(dǎo)劑和PBS中的抗氧化劑一起孵育。
2. 強(qiáng)烈建議包括陽(yáng)性和陰性對(duì)照
? TBHP*(過(guò)氧化氫叔丁酯,ROS誘導(dǎo)劑)可用作陽(yáng)性對(duì)照。
? 用抗氧化劑(α生育酚或丁基化羥基甲苯**)預(yù)處理的細(xì)胞在用TBHP處理后可用作陰性對(duì)照。
3. 用于ROS檢測(cè)的BDP 581/591染料的推薦終濃度為5μM或更高。
4. 孵育 30 分鐘足以用 BDP581/591 染料染色。
5. 在FL1通道中測(cè)量熒光(使用530/30 BP濾光片)
*或者,過(guò)氧化氫(H2O2) 可以使用。
**不推薦將NAC(N-乙?;?/span>-L-半胱氨酸)作為抗氧化劑,因?yàn)樗?/span>BDP581/591染料的幾個(gè)系列實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有顯示出抗氧化作用。
使用 BDP 581/591 染料進(jìn)行 ROS 檢測(cè)的應(yīng)用實(shí)例
該實(shí)驗(yàn)是在NS0細(xì)胞上進(jìn)行的。NS0懸浮培養(yǎng)是一種源自小鼠骨髓瘤的模型細(xì)胞系,用于生物醫(yī)學(xué)研究。細(xì)胞在含有10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
? ROS 誘導(dǎo)劑:TBHP(過(guò)氧化氫叔丁酯)
? 抗氧化劑:α-生育酚、丁基化羥基甲苯
? 檢測(cè):BDP 581/591 羧酸,CellROX 橙色試劑(用于比較目的)
通過(guò)將α-生育酚(3.2mg)溶解在96%(0.5mL)乙醇中來(lái)制備α-生育酚(15mM)的溶液。
通過(guò)將丁基化羥基甲苯(900μg)溶解在96%(1mL)乙醇中來(lái)制備丁基化羥基甲苯(4mM)的溶液。
通過(guò)將BDP 581/591羧酸(40mg)溶解在DMSO(1 mL)中來(lái)制備BDP 581/591羧酸(100 mM)的溶液。從該儲(chǔ)備溶液中,取出體積為2.5μL的樣品,并在去離子無(wú)菌水(1mL)中稀釋,以制備濃度為250μM的溶液。
1.通過(guò)離心(800g持續(xù)8分鐘)收集細(xì)胞,重懸于預(yù)熱的PBS(0.5mL)中并分成樣品(每個(gè)樣品30萬(wàn)個(gè)細(xì)胞)。
2.制備了以下樣品:
?抗氧化劑#1:將α生育酚(5μL,15mM)加入樣品(細(xì)胞懸浮液,30萬(wàn)個(gè)細(xì)胞)(最終濃度150μM)。
?抗氧化劑#2:將丁基化的羥基甲苯(1μL,4mM)加入樣品(細(xì)胞懸浮液,30萬(wàn)個(gè)細(xì)胞)(最終濃度8μM)。
將細(xì)胞與抗氧化劑在+37oС下孵育1小時(shí)。接下來(lái)加入TBHP(2μL,50mM)(最終濃度200μM),并將樣品在+37oС下孵育30分鐘。
?ROS誘導(dǎo)劑:加入TBHP(2μL,50mM)(最終濃度為200μM),并將樣品在+37oС下孵育30分鐘。
3. 樣品用熒光團(tuán)處理:
?將BDP 581/591羧酸(10μL,250μM)加入樣品中(最終濃度為5μM)。
?將CellROX橙色試劑(1μL,250μM)加入到樣品中(新鮮溶液,最終濃度為500nM)。
4. 將所有樣品在+37oС下孵育30分鐘。
5. 流式細(xì)胞術(shù)使用BD FACSCalibur(BD Biosciences)分析儀進(jìn)行。使用以下帶通(BP)濾光片配置的對(duì)數(shù)擴(kuò)增標(biāo)度:488 nm激發(fā)線,FL1(530/30 BP用于收集BDP 581/591熒光信號(hào))和FL2(585/42 BP用于收集CellROX橙色熒光信號(hào))。典型的運(yùn)行使用具有約10,000個(gè)細(xì)胞的樣品。
將細(xì)胞置于正向(FS)和側(cè)散射(SS)點(diǎn)圖上,隨后分析BDP 581/591試劑和CellROX橙試劑的中位熒光強(qiáng)度。
BDP 581/591其他衍生物:
BODIPY 581/591-alkyne氟化硼二吡咯581/591炔烴
BODIPY 581/591-amine氟化硼二吡咯581/591-氨基
BODIPY 581/591-carboxylic acid氟化硼二吡咯581/591-羧基
BODIPY 581/591-NHS ester氟化硼二吡咯581/591-NHS ester
BODIPY 581/591-azide氟化硼二吡咯581/591-疊氮
BODIPY 581/591-hydrazide氟化硼二吡咯581/591-酰脛
BODIPY 581/591-maleimide氟化硼二吡咯581/591-馬來(lái)酰亞胺
BODIPY 581/591-tetrazine氟化硼二吡咯581/591-四嗪
BODIPY 581/591-DBCO氟化硼二吡咯581/591-DBCO
BODIPY偶聯(lián)物:
氟化聚多肽納米顆粒負(fù)載光敏劑(BODIPY-2Br)
三苯基膦(TPP)負(fù)載碘化光敏劑(BDPI)納米顆粒(PBDPI-TPP)
1,3,5,7-四甲基-4-苯基-(4-碘乙配胺)-BODIPY(TMPAB-I)
3,5-二芳基乙烯共軛BODIPY染料
3,5二苯乙烯基BODIPY染料
炔基修飾BODIPY染料
呋喃偶聯(lián)BODIPY染料
噻吩偶聯(lián)BODIPY并環(huán)產(chǎn)物染料
蒽基修飾BODIPY染料
寡聚噻吩修飾BODIPY染料
aza-BODIPY-Br2
噻吩并環(huán)BODIPY熒光染料
芳香醛修飾BODIPY染料
吡啶修飾Aza-BODIPY染料
8-羥基喹啉基團(tuán)修飾BODIPY染料熒光探針
烷基胺修飾BODIPY染料
二苯乙烯基 BODIPY 衍生物
寡核苷酸(乙二醇)醚基修飾BODIPY染料
熒光分子探針TEG-DMA-Aza-BODIPY
熒光探針DCMA-Aza-BODIPY
熒光探針BODIPY-diONs
硫醇熒光探針Cz-BODIPY NBD
NBD熒光團(tuán)修飾氮雜BODIPY
序號(hào) | 新聞標(biāo)題 | 瀏覽次數(shù) | 作者 | 發(fā)布時(shí)間 |
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