- 029-86354885
- 18392009562
產(chǎn)品名稱:FITC-PEG-COOH,熒光素PEG羧基
實驗操作指南
1. 生物分子偶聯(lián)
EDC/NHS法:
將FITC-PEG-COOH(1 eq)溶于MES緩沖液(pH 5.5),加入EDC(4 eq)和NHS(10 eq),室溫活化30分鐘。
加入含氨基的目標分子(如抗體,1.2 eq),4℃反應12小時,透析純化。
標記效率檢測:熒光分光光度計測定FITC濃度(ε=68,000 M?1cm?1),計算偶聯(lián)比(FITC/蛋白)。
2. 納米材料修飾
金納米顆粒(AuNPs):
制備13 nm AuNPs,加入FITC-PEG-COOH(50 eq相對于Au),室溫攪拌24小時。
離心洗滌,Zeta電位從-30 mV變?yōu)?20 mV(因FITC帶負電),熒光強度與PEG長度正相關(2 kDa PEG熒光強度是5 kDa的1.5倍)。
3. 細胞成像實驗
步驟:
將FITC-PEG-COOH標記的抗體與細胞共孵育30分鐘,PBS洗滌后熒光顯微鏡觀察,綠色熒光信號強度與抗體濃度呈線性關系(R2=0.99)。
優(yōu)勢與局限性
優(yōu)勢:
雙功能設計:PEG提高水溶性和生物相容性,F(xiàn)ITC提供高靈敏熒光信號。
反應活性高:羧基可直接偶聯(lián)含氨基分子,無需額外活化步驟。
應用廣泛:適用于蛋白質、核酸、納米材料等多種底物標記。
局限性:
光漂白性:FITC在持續(xù)光照下易淬滅,需優(yōu)化成像條件(如降低激光功率)。
pH敏感性:熒光強度在pH<5時顯著下降,不適用于酸性環(huán)境(如溶酶體)。
背景干擾:血清中FITC自發(fā)熒光可能導致假陽性,需優(yōu)化洗滌步驟。
溫馨提示:僅用于科研,不能用于人體實驗!wyh
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