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產(chǎn)品名稱：FITC-PEG-COOH，熒光素PEG羧基

實驗操作指南

1. 生物分子偶聯(lián)

EDC/NHS法：

將FITC-PEG-COOH（1 eq）溶于MES緩沖液（pH 5.5），加入EDC（4 eq）和NHS（10 eq），室溫活化30分鐘。

加入含氨基的目標分子（如抗體，1.2 eq），4℃反應12小時，透析純化。

標記效率檢測：熒光分光光度計測定FITC濃度（ε=68,000 M?1cm?1），計算偶聯(lián)比（FITC/蛋白）。

2. 納米材料修飾

金納米顆粒（AuNPs）：

制備13 nm AuNPs，加入FITC-PEG-COOH（50 eq相對于Au），室溫攪拌24小時。

離心洗滌，Zeta電位從-30 mV變?yōu)?20 mV（因FITC帶負電），熒光強度與PEG長度正相關（2 kDa PEG熒光強度是5 kDa的1.5倍）。

3. 細胞成像實驗

步驟：

將FITC-PEG-COOH標記的抗體與細胞共孵育30分鐘，PBS洗滌后熒光顯微鏡觀察，綠色熒光信號強度與抗體濃度呈線性關系（R2=0.99）。

優(yōu)勢與局限性

優(yōu)勢：

雙功能設計：PEG提高水溶性和生物相容性，F(xiàn)ITC提供高靈敏熒光信號。

反應活性高：羧基可直接偶聯(lián)含氨基分子，無需額外活化步驟。

應用廣泛：適用于蛋白質、核酸、納米材料等多種底物標記。

局限性：

光漂白性：FITC在持續(xù)光照下易淬滅，需優(yōu)化成像條件（如降低激光功率）。

pH敏感性：熒光強度在pH<5時顯著下降，不適用于酸性環(huán)境（如溶酶體）。

背景干擾：血清中FITC自發(fā)熒光可能導致假陽性，需優(yōu)化洗滌步驟。

溫馨提示：僅用于科研，不能用于人體實驗！wyh

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